全长抗体及scFv结构图
| Antibody Description | Unconjugated | Biotin | FITC | PE | iFluor 488 | iFluor 555 | iFluor 647 | HRP |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Ex=491 nmEm=516 nm | Ex=565 nmEm=574 nm | Ex=491 nmEm=516 nm | Ex=557 nmEm=570 nm | Ex=656 nmEm=670 nm | ||||
| MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail | A02282 | A02283 | A02284 | A02285 | A02286 | A02287 | A02288 | A02289 |
| Anti-scFv Antibody Cocktail (Min X)* | A02303 | A02315 | A02304 | A02305 | A02306 |
*Anti-scFv antibody Cocktail (Min X) 对人IgG, 小鼠IgG, 山羊IgG和兔IgG无交叉反应。
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ELISA结果显示MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282) 可特异性识别不同来源、不同连接顺序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv以及不同形式的基于scFv的双特异性抗体，如BiTE, IgG(H)-(scFv)2, (scFv)2-(H)IgG, scFv-Fab-Fc等。
图1：Anti-scFv抗体对不同序列scFv和双特异性抗体的结合曲线
不同来源、不同连接顺序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv或不同形式的双特异性抗体以1 μg/mL的浓度包被在酶标板上；A02282浓度从0.017 ng/mL到1000 ng/mL；酶标二抗使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb(GenScript, A01856)，稀释比例为1：20000。
生物膜干涉技术（BLI）结果显示MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)对不同来源、不同连接顺序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv以及不同形式的基于scFv的双特异性抗体具有较高的亲和力。
图1：BLI检测Anti-scFv抗体对不同序列scFv和双特异性抗体的亲和力
WB结果显示MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)对不同来源scFv及双特异性抗体BiTE均具有较高的灵敏度。
图1：Western Blot检测Anti-scFv抗体对不同来源scFv和双特异性抗体的灵敏度
MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)按1：5000稀释，4℃孵育过夜；二抗采用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10)[HRP], mAb (GenScript, A01856)，1：20000稀释，室温孵育1h。
三批次MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)对scFv表现出一致的结合曲线，各浓度点CV<10%。
图1：ELISA检测MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail的批次稳定性
scFv包被浓度为1 μg/mL；MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail（GenScript, A02282）从111 ng/mL开始进行3倍梯度稀释；检测抗体使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb (GenScript, A01856)，稀释比例为1：20000。
竞争ELISA结果显示Anti-scFv抗体在与scFv的结合后并不影响scFv对其靶抗原的结合。
图1：Anti-scFv抗体与scFv或双特异性抗体的结合并不影响scFv或双特异性抗体对其靶抗原的结合活性
Antigen #1、Antigen #2和Antigen #3包板后，将A02282与Humanized scFv #1、Mouse scFv #2或Bispecific antibody #3混合后加入孔板中反应，随着A02282浓度的提高，Humanized scFv #1、Mouse scFv #2或Bispecific antibody #3对其靶抗原结合能力并没有显著变化，相比于未加入A02282的变化幅度在80%-120%之间，表明A02282对scFv结合其相应抗原的影响较小。靶点及scFv信息如下： Humanized scFv#1:anti-VEGF scFv; Antigen#1:VEGF; Mouse scFv#2: anti-BCMA scFv; Antigen#2: BCMA; Bispecific Antibody#3: anti-CD19×anti-CD3, BiTE; Antigen#3: CD3.
太阳成集团122cc的Anti-scFv抗体对基于scFv的CAR-T细胞表现出超高的特异性。实验结果显示不同稀释比例的Anti-scFv抗体均能准确检测CAR-T细胞的阳性率，且该抗体对未被编辑的T细胞表现出极低的非特异性结合，因此可用于CAR-T细胞的表征。
图1：Anti-scFv抗体表征基于scFv的CAR-T细胞
使用不同稀释比例（1：50-1：500）的MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [iFluor 647] (GenScript, A02288) 检测相同的CAR-T细胞。MonoRab™ Rabbit IgG Control [iFluor 647] (Whole Molecule), mAb (GenScript, A02026)对CAR-T细胞的染色以及A02288对naïve T细胞的染色作为阴性对照。
流式细胞术结果显示Anti-scFv抗体相比于Protein L和Anti-Fab抗体具有更优的细胞分群效果和更高的检出率。
图1：基于scFv的CAR-T细胞表征工具比较
使用相同浓度的MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282) 、FITC-Labeled Recombinant Protein L 和 Alexa Fluor® 647 AffiniPure Goat Anti-Human IgG, F(ab’)2 检测相同数量和结构的CAR-T细胞。其中，Anti-scFv抗体的荧光信号由Alexa Fluor® 488-Labeled Goat Anti-Rabbit IgG提供。
Anti-scFv抗体可用于检测人源化scFv、鼠源scFv和双特异性抗体对其靶蛋白的结合能力。
图1：Anti-scFv抗体检测scFv/双特异性抗体对其靶抗原的结合曲线
抗原包被浓度为1 μg/mL；scFv浓度从1.37 ng/mL到1000 ng/mL；A02282浓度为1 μg/mL；酶标二抗使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb(GenScript, A01856)，稀释比例为1：20000。靶点及scFv信息如下：Humanized scFv#1:anti-VEGF scFv; Antigen#1:VEGF; Mouse scFv#2: anti-BCMA scFv; Antigen#2: BCMA; Bispecific Antibody#3: anti-CD19×anti-CD3，BiTE; Antigen#3: CD3.
流式细胞术结果显示Anti-scFv抗体对结合scFv的细胞表现出较高的特异性信号，对未结合scFv的细胞表现出较低的非特异性信号，因此可用于检测scFv对其靶细胞的结合能力。
图1：Anti-scFv抗体检测scFv对其靶细胞的结合活性
使用MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [FITC](GenScript, A02284)分析anti-CD20抗体对Raji细胞的结合能力。其中蓝色实线代表未染色细胞，红色实线代表仅加入A02284的细胞，绿色实线代表加入anti-CD20 scFv和A02284的细胞。
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